Обзор иммунодиагностики
1. Базовая концепция
(1) антитела (Ab) и антигены (Ag)
Антитела: это относится к защитному белку, произведенному организмом из-за стимуляции антигена, который выделяется эффекторными клетками в позвоночниках, которые можно разделить на IgG, IgM, IgA, IgD, И IgE. IgG является изотипом с самым высоким содержанием в сыворотке и жидкостях тела, что составляет 75% до 80%. IgG является основным антитела, вырабатываемым вторичным иммунным ответом, «основной силой» анти-инфекции организма, и наиболее используемым антитела в иммунодиагностике.
Антиген: это относится к веществу, которое может вызвать выработку антител и любого вещества, которое может вызвать иммунный ответ в организме. Антигены являются иностранными, макромолекулярными и специфическими. Специфика антигена означает, что антиген может связываться только с соответствующими антитела или эффекторными Т-клетками, которые химические Группы определяют на поверхности молекулы, называемые антигенными детерминантами. Молекулярная масса антигена обычно составляет> 10 кДа, и чем больше молекулярная масса, тем сильнее антигенность.
(2) поликлональные антитела и моноклональные антитела
Поликлональные антитела: естественные молекулы антигена часто содержат различные антигенные эпитопы, стимулируя иммунную систему организма с помощью этого антигена, могут активировать различные клоны клеток B одновременно, И полученные антитела будут содержать различные антитела против различных эпитопов, поэтому они называются поликлональными антитела.
Моноклональное антитела-это очень однородное антитела, произведенное одним B клеточным клоном, которое предназначено только для конкретного эпитопа. Обычно готовят с использованием технологии hybridoma. Эффекторные B клетки и клетки миеломы плавленые для формирования B клеток гибридомы. Моноклональное антитела может производить путем культивирования одной гибридомы в популяцию клеток, специфических для эпитопа. Сродство и специфичность моноклональных антител, как правило, лучше, чем у поликлональных антител.
(3) рекомбинантные антитела и рекомбинантные антигены
Рекомбинантные антитела: генно-проектированные антитела-это антитела, произведенные в Витро с использованием технологии рекомбинации генов и технологии белковой инженерии. Получите последовательность генов антитела, создайте вектор экспрессии и перенесите его в хост экспрессии (например, дрожжи, клетки насекомых, клетки млекопитающих или бактерии). Таким образом, производство антител освобождено от ограничений иммунной системы. В то же время могут образовываться как полноразмерные антитела, так и различные антитела.
Рекомбинантные антигены: как правило, рекомбинантные антигены относятся к рекомбинантным белкам по своей сущности, а также являются белками, произведенными in vitro по технологии рекомбинации генов и технологии белковой инженерии.
2. Принципы иммунодиагностики
(1) метод двойной моноклональной антитела сэндвич
Двойной моноклональный антитела сэндвич метод: Используйте твердосплавный носитель фазы, чтобы покрыть одно антитела и маркировать другое маркированное антитела для обнаружения антигена, который будет протестирован, А затем образует комплекс с покрытием Ab-Ag-маркировка Ab. Этот метод в основном обнаруживает антигенные вещества.
Фото: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) Непрямой метод
Непрямой метод: метод обнаружения, в котором используется однофазный носитель для иммобилизации антигена и маркировки вторичных антител. Этот метод в основном используется для обнаружения антител IgG в образцах. Для обнаружения антитела в образце формируется комплекс вторичного Ab с покрытием АГ-target.
Фото: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) метод захвата
Метод захвата: Метод обнаружения, при котором однофазный носитель используется для покрытия вторичного антитела и другого напряжения маркированного антигена для обнаружения антитела. Формируется и тестируется комплекс вторичных Ab-target Ab-MARKED Ag. Этот метод в основном используется для обнаружения IgM в образце.
Фото: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(4) метод соревнований
Метод соревнований: Конкурентная вязка покрытого/маркированного антитела с маркированным/покрытым антигеном и тестовым антигеном. Этот метод в основном используется для обнаружения мелких молекулярных антигенов.
Фото: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
Метод 1: нанесите антитела на твердую фазу, отметьте антиген, добавьте образец, антиген, который будет протестирован, конкурирует за место связывания антител, Стирайте, выводите результат
Метод 2: пальто антиген на твердой фазе, этикетка антитела
3. Развитие иммунодиагностики
Иммунодиагностика применяет иммунологию, методы и средства для диагностики различных заболеваний и определения иммунного статуса. С развитием технологии, иммунодиагностика прошла иммуноэлектрофорез, анализ осадков и агглютинации, радиоиммуноанализ, иммунофлуоресцентный, иммуноферментный иммуносорбентный ассай, иммунотурбиметрия, Коллоидное золото и флуоресцентная микросфера маркировки, блогирующие полоски, протеиновые чипы, технология управления микрофлюидиками и обнаружение одной молекулы.
(1) иммуносорбентный ассай, связанный с ферментом (ELISA)
Иммуносорбентный ассай, связанный с ферментом (ELISA)-это метод обнаружения, который сочетает в себе принцип иммунной реакции с технологией иммобилизации и технологией маркировки ферментов. Во-первых, используйте многоярусную пластину из полистирола для покрытия антигена/антитела, связывайте вещество, которое будет Протестировано в образце, и добавьте пероксидазу хрп или щелочную фосфатазу (AP) после стирки нанесите этикетку на антитела/антиген для формирования иммунного комплекса. Затем добавьте ферментативную хромогенную подложку и стоп-раствор, чтобы прекратить реакцию. Наконец, качественно или количественно определить содержание образца анализа по цвету OD.
Фото Кредит: https://www.biotekchina.com.cn/приложения/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) Коллоидное золото/флуоресцентная иммунохроматография
Коллоидное золото: обратитесь к золотому Солю с диаметром дисперсной фазы от 1 до 150 нм, а цвет оранжевый-красный до фиолетовый-красный.
Коллоидная иммунохроматография золота: Метод обнаружения, который использует коллоидные Позолоченные антитела, использовать нитроцеллюлозную мембрану (мембрана NC) в качестве твердофазного носителя для покрытия антигена/антитела, И использует капиллярное действие мембраны NC для хроматографии жидкости от одного конца мембраны до другого конца, в то же время, Иммунная реакция происходит во время хроматографии.
Флуоресцентная иммунохроматография: технология иммунохроматографического обнаружения изменяет Коллоидное золото в флуоресцентную микросферическую маркировку.
Фото Кредит: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) хемилюминесцентный иммуноанализ
Chemiluminescence: относится к излучению света, которое сопровождается процессом химических реакций.
Метод иммуноанализа хемилюминесценции: Метод обнаружения, который использует многоярусные пластины или магнитные частицы в качестве твердых носителей для покрытия антигена/антитела, добавить анализатор и люминофор для маркировки антигена/антитела для формирования иммунного комплекса, после стирки химически стимулирует комплекс или подложку к излучению света и определяет содержание анализатора по интенсивности свечения.
Кредит изображения: https:/www.sepmag.eu/blog/bid/335317/the-two-key-причины-выбор-chemiluminescence-для-иммуноанализа
(4) Классификация хемилюминесцентного иммуноанализа
Классификация по несущей поверхности: она разделена на пластинчатую химическую и магнитную грануляцию. В настоящее время пластинчатая Хемилюминесценция была устранена.
Классификация по люминесценции: делится на непрямую люминесценцию (ферментативную), прямую люминесценцию (эфир акридина, люминол) и электрохимическую.
